VIRA-PORE空氣病毒采樣盒
空氣采樣盒，用于收集病毒顆粒
具有ZePore™過濾器的Vira-Pore病毒采樣盒經過專門設計和驗證，可用于收集空氣傳播中的冠狀病毒，并且它可用于采樣其他類似的病毒。
目標
為了確定冠狀病毒空氣采樣的合適參數，本驗證采用直徑37mm孔徑1 µm的PTFE層壓“ ZePore” 空氣病毒過濾器對冠狀病毒的替代物--人類冠狀病毒OC43（HCoV OC43）進行空氣采樣。 人冠狀病毒OC43和COVID病毒均為正向單鏈RNA（+ ssRNA）β包裹的冠狀病毒，因此OC43是合適的COVID病毒模擬物。 通常以往在過濾器上進行病毒采樣的研究沒有包括基本的驗證數據，例如確定從過濾器上洗脫病毒的合適技術，在采樣過程中或在運輸及存儲過程中病毒在過濾器上的穩定性等數據。
方法
標準化病毒空氣采樣的持續時間，提取洗脫的病毒RNA，然后用超微量核酸蛋白分析儀進行RNA定量（ng / µL為單位），采用熒光定量PCR儀對現場樣品進行測試，所有實驗均重復三次（除非另有說明）。實驗結果采用病毒相對回收質量（relative recovery）來表示。病毒相對回收質量（RRmass）是從過濾器洗脫的病毒質量濃度（ng / ml）相對于初始霧化器懸浮液中病毒質量濃度（ng / ml）的比率。過濾器安裝在“開口式”的37mm三層導電聚丙烯盒中。導電盒優選用于空氣微粒采樣，以防止靜電吸附到盒壁。空氣流量初步設置為10 L / min，方便在短時間內較大程度地收集病毒。帶有過濾器和支撐墊的壓降為17英寸水壓，與某些個人采樣泵（例如Gilian 12或GSA SG10或SG10-2）兼容。空氣樣品以10 L / min的流量進行病毒顆粒空氣采樣10分鐘，同時另一個樣品采用對過濾器加標病毒顆粒懸浮液，兩個樣品均使用兩種不同的方法對病毒RNA進行洗脫。兩種情況下回收率均較高的洗脫方法都是將濾膜向內卷起來，然后將其放入裝有1 mL MTM培養基（Longhorn Vaccines and Diagnostics™，Inc。）的2 mL微量離心管中，并渦旋三次，每次渦旋10秒。霧化病毒懸浮液是使用Collison霧化器在II級生物安全柜中產生的。此過程產生的平均空氣傳播顆粒濃度為～1 x 10^8/ L。進行空氣采樣，采樣10分鐘，60分鐘后，立即將濾膜中的病毒洗脫下來， 或采樣10分鐘將其暴露在清潔的氣流中60分鐘再洗脫病毒。
結果
對于采樣10分鐘的樣品，RNA質量濃度和RRmass（圖1中的紫色條）分別為2.0 x 10^6 ng / mL（±1.06 x 10^6）和0.55（±0.18）。對于采樣60分鐘的樣品，平均RNA質量濃度為5.98 x 10^6 ng / mL（±1.79 x 10^6），調整采樣時間后的RRmass（圖1中的藍色條）為0.32（±0.10）。在采樣10分鐘的樣品中，然后將其暴露在清潔的氣流中60分鐘，RNA質量濃度和RRmass（圖1中的橙色條）分別為2.17 x 10^6 ng / mL（±6.97 x 105）和0.50（±0.16）。這些結果表明，在分別采樣10分鐘，60分鐘和10分鐘，然后暴露于清潔氣流60分鐘后，霧化病毒的回收率是相似的，差異無統計學意義（p = 0.31）。在另一個實驗中，空氣樣本分別在4°C和25°C下存儲7天。在4°C下，RNA質量濃度為4.41 x 106 ng / mL（±2.51 x 10^6），在25°C下存儲時為1.34 x 10^6 ng / mL（±8.23 x 105）。因此，房間存放條件下的平均濃度比冰箱存放條件下的平均濃度低3.3倍。由于實驗的可變性，差異沒有顯著差異（p = 0.11）。如圖1所示，4°C存儲（綠色條）和25°C存儲（黃色條）的RRmass分別為0.55（±0.31）和0.17（±0.10）。通過qRT-PCR進一步分析了上述每組實驗中的一個洗脫樣品，以顯示總RNA分析方法未產生誤導性結果。 對于這兩個樣品，檢測到的RNA濃度相似：每毫升4.01 x 10^6 RNA拷貝（用于4°C儲存）和每毫升4.18 x 10^6 RNA拷貝（用于25°C儲存）。對于這兩個樣品，qRT-PCR的CT值均高于30，是接近檢測下限的Ct值。 這可以解釋兩個微量樣品之間值的相似性，以及為什么與總RNA分析不同，兩個樣品之間的差異不明顯。 在進行進一步工作之前，建議在分析之前將樣品冷藏保存。
結論
•COVID病毒的替代物人類冠狀病毒OC43（HCoV OC43）被成功霧化，收集并回收用于分析。
•與搖床方法相比，渦旋洗脫產生更高的RNA濃度。
•在三種不同的采樣場景（10分鐘，60分鐘和10分鐘后暴露于60分鐘的清潔氣流）后，從過濾器中回收霧化病毒的差異沒有顯著差異。
•比較在4°C和25°C儲存后病毒的回收率，與在25°C儲存后相比，病毒在4°C儲存后的回收率高約3倍； 但是，由于實驗的可變性，差異沒有統計學意義。
注意：VIRA-PORE病毒采樣盒已經過測試可從COVID替代病毒中回收RNA病毒，但尚未測試過從COVID病毒中收集RNA病毒。 請參閱技術摘要說明的測試方法和測試結果。 客戶應自己負責遵守（i）產品使用說明和（ii）收集空氣傳播的病毒后，與產品的使用和安全處理以及包裝，標簽和運輸有關的所有適用的政府法律，規則，法規和行業標準。生產商建議您在進行任何空氣采樣之前，先向具有病毒專業知識的合格環境微生物實驗室尋求指導。 尋求指導，安全的處理和運輸程序，因為COVID病毒是高度傳染性的病原體，如果暴露則具有重大健康隱患。
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